虫(chong)草素的(de)提取技术

　　1、水提法

　　以人工(gong)蛹虫(chong)草固体培养残基(ji)为原料，采(cai)用索氏提(ti)取(qu)法提(ti)取(qu)：准确(que)称取(qu)处理好的(de)样品各10g，共4分(fen)，分(fen)别(bie)加入水、75%乙醇(chun)、95%乙醇(chun)、和无(wu)水乙醇(chun)做提(ti)取(qu)剂，在(zai)沸(fei)水浴中抽提(ti)8小时，收集提(ti)取(qu)液，除杂、浓(nong)缩(suo)，离子交换柱分(fen)离，收集洗脱(tuo)液，分(fen)别(bie)用红(hong)紫酸胺反应定性定量鉴定虫(chong)草素(su)的(de)含量。发(fa)现(xian)虫(chong)草素(su)得率分(fen)别(bie)为：0.0122%、0.0078%、0.0053%和0.0052%。

　　对(dui)人工蛹虫(chong)草(cao)子(zi)(zi)实体(ti)(ti)及(ji)培养基(ji)(ji)中(zhong)虫(chong)草(cao)素进行提取、纯(chun)(chun)化及(ji)纯(chun)(chun)度(du)(du)鉴定(ding)。结(jie)(jie)果，经过对(dui)蛹虫(chong)草(cao)子(zi)(zi)实体(ti)(ti)及(ji)培养基(ji)(ji)的粉(fen)碎、石油醚脱脂、80-85℃水浴12小时、调节等电点沉淀、732-NH4离子(zi)(zi)交(jiao)换(huan)树脂的分离、浓缩、4℃下低温结(jie)(jie)晶(jing)，可得到(dao)一定(ding)纯(chun)(chun)度(du)(du)的虫(chong)草(cao)素晶(jing)体(ti)(ti)。

　　2、超临界萃取法

　　超临界流(liu)体萃取技(ji)术是(shi)近年(nian)来迅速发展被人(ren)们所(suo)认知，而称之为“绿(lv)色(se)分(fen)(fen)(fen)离(li)”的一种新(xin)型分(fen)(fen)(fen)离(li)技(ji)术。CO2作为常用的超临界流(liu)体，具有(you)操作温度低、分(fen)(fen)(fen)离(li)效率高，无(wu)毒(du)、无(wu)溶剂残留、无(wu)二次(ci)污染等优(you)点(dian)(dian)，较(jiao)之于传统(tong)提(ti)取方(fang)法(fa)，超临界CO2萃取克服(fu)了前者提(ti)取时(shi)间长、温度高、系统(tong)开放等缺点(dian)(dian)，可同时(shi)萃取出较(jiao)多(duo)的极性组(zu)分(fen)(fen)(fen)，非常适合(he)于生物(wu)资源有(you)效成分(fen)(fen)(fen)的提(ti)取分(fen)(fen)(fen)离(li)。

　　以食用真菌虫草或(huo)北(bei)虫草人工培养后的发酵(jiao)物为原料(liao)，采用超临界技术(shu)萃(cui)取(qu)(qu)有(you)效(xiao)成分，同(tong)时结(jie)(jie)合(he)常规方法除去杂质、浓(nong)缩、结(jie)(jie)晶(jing)获得虫草素，并对(dui)虫草素的紫外(wai)与(yu)红外(wai)光谱特征与(yu)标(biao)准品进(jin)行了验证，表明所提取(qu)(qu)结(jie)(jie)晶(jing)纯度大于98%。

　　3、酶法提取

　　在中(zhong)(zhong)药提取过程(cheng)中(zhong)(zhong)，溶剂(ji)需(xu)要克服来自细(xi)(xi)胞(bao)(bao)壁(bi)(bi)(bi)及细(xi)(xi)胞(bao)(bao)间(jian)质的传质阻力。选用合适的酶(mei)对中(zhong)(zhong)药材进行(xing)预处(chu)理，能分解构(gou)成细(xi)(xi)胞(bao)(bao)壁(bi)(bi)(bi)的纤维(wei)素(su)、半纤维(wei)素(su)、及果胶，从而破坏细(xi)(xi)胞(bao)(bao)壁(bi)(bi)(bi)的结构(gou)，产生局(ju)部的坍塌、溶解、疏松(song)，减少溶剂(ji)提取时来自细(xi)(xi)胞(bao)(bao)壁(bi)(bi)(bi)和细(xi)(xi)胞(bao)(bao)间(jian)质的阻力，加快有效(xiao)成分溶出细(xi)(xi)胞(bao)(bao)的速率，提高提取效(xiao)率，缩短提取时间(jian)。而且反应条件温和，产物不易变性，降低成本，环保节(jie)能。

　　研究UPLC测定(ding)虫草(cao)素(su)(su)的方法及酶(mei)(mei)(mei)(mei)法提取(qu)蛹(yong)虫草(cao)中虫草(cao)素(su)(su)的工艺条件(jian)。对酶(mei)(mei)(mei)(mei)种类、酶(mei)(mei)(mei)(mei)用量、酶(mei)(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)温度、酶(mei)(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)时间、酶(mei)(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)pH值(zhi)进行考察(cha)，确定(ding)提取(qu)工艺。结果，中性蛋白酶(mei)(mei)(mei)(mei)提取(qu)蛹(yong)虫草(cao)中虫草(cao)素(su)(su)的工艺为：酶(mei)(mei)(mei)(mei)用量1.5%，酶(mei)(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)温度50℃，酶(mei)(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)pH值(zhi)5.5，酶(mei)(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)时间60min。该(gai)工艺条件(jian)下(xia)，虫草(cao)素(su)(su)提取(qu)得(de)率为0.732%，与未加(jia)酶(mei)(mei)(mei)(mei)的热(re)水浸提相比，虫草(cao)素(su)(su)提取(qu)得(de)率增加(jia)6.2倍。